RESUMO: Pasteurella (P.) multocida é o agente da pasteurelose pneumônica em suínos, a qual é comumente associada com o estágio final da pneumonia enzoótica suína ou complexo das doenças respiratórias dos suínos. Apesar de ser uma das doenças mais comuns e importantes na suinocultura, dados sobre suscetibilidade antimicrobiana de isolados de P. multocida são raros no Brasil. Dessa forma, o presente estudo foi realizado para determinar e comparar o perfil de suscetibilidade de isolados de P. multocida de suínos com lesões de pneumonia ou pleurite no Brasil durante dois períodos. Isolados históricos (período de 1981 a 1997; n=44) e contemporâneos (período de 2011 a 2012; n=50) foram usados para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de amoxicilina, enrofloxacina, florfenicol e tetraciclina através do teste de microdiluição em caldo. Florfenicol apresentou o menor nível de resistência para ambos os isolados históricos e contemporâneos (0% e 6%, respectivamente), enquanto que tetraciclina apresentou o maior nível de resistência (20.5% e 34%, respectivamente). Resistência a múltiplos antimicrobianos (amoxicilina, florfenicol e tetraciclina) foi observada em 6% dos isolados recentes. Foi observado aumento significativo (p˂0.05) na resistência a amoxicilina e enrofloxacina em isolados recentes comparado com isolados históricos (3.8% e 18%, respectivamente), provavelmente devido à pressão de seleção de antimicrobianos usados no tratamento e prevenção de infecções causadas por P. multocida. Os resultados deste trabalho demostraram o aumento de isolados resistentes a importantes drogas utilizadas no tratamento de infecções causadas por P. multocida em suínos, evidenciando a necessidade da implementação do uso racional de antimicrobianos na suinocultura brasileira.

ABSTRACT: Pasteurella (P.) multocida is the causative agent of pneumonic pasteurellosis in swine, which is commonly associated with the final stages of enzootic pneumonia or porcine respiratory disease complex. Although this syndrome is one of the most common and important diseases of pigs, data on antimicrobial susceptibility of P. multocida isolates are uncommon in Brazil. Therefore, the present study was carried out to determine and to compare antimicrobial susceptibility profile of Brazilian P. multocida isolated from pigs with lesions of pneumonia or pleuritis during two-time periods. Historical isolates (period of 1981 to 1997; n=44) and recent isolates (period of 2011 to 2012; n=50) were used to determine the MIC of amoxicillin, enrofloxacin, florfenicol and tetracycline by microbroth dilution. Florfenicol had the lowest level of resistance for both historical and recent isolates (0% and 6%, respectively), while tetracycline had the highest (20.5% and 34%, respectively). Multi-drug resistance (MDR) to amoxicillin/florfenicol/tetracycline was observed in 6% of recent isolates. There was a significant increase (p˂0.05) in resistance for amoxicillin and enrofloxacin in recent isolates compared with historic isolates (3.8% and 18%, respectively), most likely due to the selective pressure of antimicrobial usage to treat and prevent P. multocida infections. The results of this study showed an increase of isolates resistant to important drugs used in treatment of P. multocida infections in pigs, demonstrating the need for the implementation of rational use of antimicrobials in Brazilian swine industry.

Resumo: Para avaliação dos aspectos patológicos e microbiológicos de casos clínicos de doenças respiratórias em suínos de terminação foram analisados 75 suínos doentes oriundos de 36 lotes. Suínos que apresentavam sinais clínicos respiratórios evidentes foram necropsiados para avaliação macroscópica e colheita de amostras para análise histopatológica e microbiológica. Foram realizados testes de isolamento bacteriano para as principais bactérias do sistema respiratório dos suínos, PCR para Mycoplasma hyorhinis, imuno-histoquímica para Influenza A, Circovirus suíno tipo 2 e Mycoplasma hyopneumoniae. A sensibilidade antimicrobiana de 24 amostras de Pasteurella multocida tipo A foi avaliada por testes de concentração inibitória mínima para os principais antimicrobianos utilizados em suinocultura. Mycoplasma hyopneumoniae e Pasteurella multocida tipo A foram os agentes infecciosos mais prevalentes. Broncopneumonia supurativa e pleurite foram as principais lesões respiratórias encontradas. Pasteurella multocida tipo A, quando presente, aumentou a extensão das lesões pulmonares. Todas as amostras de Pasteurella multocida testadas foram sensíveis aos antimicrobianos Doxiciclina, Enrofloxacina e Tilmicosina. Em 58% das amostras foi identificado mais de um agente infeccioso, evidenciando a alta prevalência da associação de agentes nas doenças respiratórias de suínos em terminação.

Abstract: For pathological and microbiological evaluation of porcine respiratory disease in fattening pigs, seventy five animals showing respiratory distress, fever and/or cough were analyzed. These pigs were necropsied and samples were collected for histological and microbiological analysis. Bacterial isolation procedures were performed aiming to detect major swine bacterial respiratory pathogens. Also, PCR for Mycoplasma hyorhinis, and immunohistochemistry for Influenza A, porcine circovirus type 2, and Mycoplasma hyopneumoniae were carried out. Mycoplasma hyopneumoniae and Pasteurella multocida type A were the most prevalent infectious agents. The antimicrobial sensitivity of 24 samples of P. multocida type A was evaluated by minimum inhibitory concentration tests and all these samples were sensitive to doxycycline, tilmicosin and enrofloxacin. Suppurative bronchopneumonia and pleuritis were main respiratory lesions found. When P. multocida type A was present, the extension of lung lesions was increased. In 58% of the samples more than one infectious agent was identified, suggesting a high prevalence of infectious agents associations in porcine respiratory disease in Brazil.

Complexo de Doenças Respiratórias de Suínos (CDRS ) é um grupo de doenças que causam grandes perdas na indústria suína. Vários agentes infecciosos estão relacionados com a CDRS , entre eles o circovírus suíno 2 (PCV -2), vírus da pseudo-raiva (SuHV -1) , Haemophilus parasuis (HP) ,Mycoplasma hypneumoniae (MH ) e Pasteurela multocida (PM). O objetivo com este estudo foi desenvolver PCR em tempo real (qPCR) para a detecção destes agentes infecciosos. Os oligonucleotídeos foram concebidos para cada agente infeccioso específico e marcado com fluoróforos diferentes para amplificar partes específicas do genoma em dois grupos de reacções , uma qPCR dúplex em SuHV -1 e PCV- 2 e uma qPCR multiplex para detectar as três bactérias simultaneamente. As reações foram testadas em 142 amostras de pools de linfonodos e pulmões de suínos com sinais clínicos de CDRS. Foram detectadas 135 amostras positivas para PCV- 2 , 61 para a HP, 29 para PM e 30 para MH e zero para SuHV -1, dentre esses foram registrados 76 casos de co-infecção . As qPCRs desenvolvidas neste estudo são ferramentas úteis no diagnóstico da CDRS.

Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) is a group of diseases that cause high losses in the swine industry. Several infectious agents are related to PRDC including porcine circovirus 2 (PCV-2), pseudorabies virus (SuHV-1),Haemophilus parasuis (HP), Mycoplasma hypneumoniae (MH) and Pasteurela multocida (PM). The aim of this study was to develop real-time PCRs (qPCR) for the detection of these infectious agents. Oligonucleotides were designed for each specific infectious agent and labeled with different fluorophores to amplify specific parts of the genome. This was done in two groups of reactions—a duplex qPCR for SuHV-1 and PCV-2 and a multiplex qPCR to detect the three bacteria simultaneously. The reactions were tested in 142 pooled samples of swine lymph nodes and lungs with clinical signs of PRDC. There were 135 samples that tested positive for PCV-2, 61 for HP, 29 for PM, 30 for MH and zero for SuHV-1. We recorded 76 cases of co-infection. The qPCRs developed in this study are useful tools in the diagnosis of PRDC.

Testes diagnósticos baseados na detecção de ácidos nucleicos sem amplificação prévia através da utilização de nanopartículas de ouro (AuNPs) têm sido descritos para várias enfermidades. Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma técnica de AuNPs não modificada para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae (App). Utilizaram-se 70 amostras de pulmão de suínos, 17 sem lesão e 53 com lesões características de pneumonia, objetivando a detecção de App. O oligonucleotídeo utilizado foi baseado no gene ApxIV. O teste de AuNPs apresentou sensibilidade de 93,8% e especificidade de 84,6% quando comparado com a detecção pela PCR. Os resultados mostraram boa concordância entre os testes de AuNPs e a PCR, sendo que a técnica pode ser utilizada como alternativa aos testes convencionais, já que é de fácil e rápida execução e não exige infraestrutura e mão de obra especializada.

Based on diagnostic tests for the detection of nucleic acids without amplification through the use of gold nanoparticles (AuNPs) have been described for various diseases. This study aimed to develop a technique of unmodified AuNPs to detect Actinobacillus pleuropneumoniae (App). We used 70 lung samples from pigs, 17 with and 53 without characteristic lesions of pneumonia, to detect App. The primer used was based on ApxIV gene. The AuNPs test had a sensitivity of 93.8% and specificity of 84.6% when compared with PCR detection. The results showed good agreement between AuNPs and PCR testing, and the technique can be used as an alternative to conventional tests, since it is quick and easy, and does not require implementation infrastructure and skilled labor.

A atividade antibacteriana de 21 extratos hidroetanólicos vegetais foi avaliada in vitro frente a 20 sorovares de Salmonella. Dos extratos testados, 85,7% apresentaram atividade antibacteriana. Os seis extratos que evidenciaram atividade sobre o maior número de sorovares e Eucalyptus sp. foram submetidos à determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM). Destes, seis extratos apresentaram atividade bacteriostática e bactericida com MIC para Punica granatum (romã) a partir de 20 e 60mg mL-1, Eugenia jambolana (jambolão) de 40 e 240mg mL-1, Eugenia uniflora (pitanga) de 80 e 240mg mL-1, Caryophyllus aromaticus (cravo) de 10 e 60mg mL-1, Psidium araca (araçá) 30 e 320mg mL-1 e Eucalyptus sp. (eucalipto) de 40 e 160mg mL-1. Achyrocline satureioides (macela) apresentou apenas atividade bacteriostática e MIC a partir de 160mg mL-1. Caryophyllus aromaticus, Eucalyptus sp. e Psidium araca apresentaram os melhores resultados para a atividade bactericida, inativando, respectivamente, 84,21%, 42,1% e 17,64% dos sorovares de Salmonella. A atividade de cada extrato variou para diferentes sorovares. Nenhum dos seis extratos avaliados evidenciou atividade bactericida frente a S. London, enquanto S. Pullorum foi o sorovar mais sensível.

in vitro antibacterial activity of 21 hydroethanolic vegetal extracts was assessed against 20 serovars of Salmonella. Regarding the tested extracts, 85.7% of them presented antibacterial activity. The six active extracts which showed activity on the largest number of serovars and the extract of Eucalyptus sp. were submitted to the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC). Of these, six extracts showed bacteriostatic and bactericidal activity with MIC and MBC for Punica granatum (pomegranate) from 20 and 60mg mL-1, for Eugenia jambolana (rose apple) from 40 and 240mg mL-1, Eugenia uniflora (surinam cherry) from 80 and 240mg mL-1, Caryophyllus aromaticus (clove) from 10 and 60mg mL-1, Psidium araca from 30 and 320mg mL-1 and Eucalyptus sp. from 40 and 160mg mL-1. Achyrocline satureioides (macela) presented only bacteriostatic potential and MIC from 160mg mL-1. Caryophyllus aromaticus, Eucalyptus sp., and Psidium araca presented the best results for bactericidal activity, inhibiting, respectively, 84.2%, 42.1%, and 17.6% of Salmonella's serovars. The activity of each extract varied for different serovars; S. London presented resistance to the six extracts in MBC, while S. Pullorum was the most susceptible serovar.

PCR multiplex foi empregado para investigar a presença de genes de enterotoxinas estafilocócicas (sea, seb, sec, sed e see) e do gene femA, específico para S.aureus, em cepas de estafilococos coagulase positiva (ECP) isoladas de queijos e derivados cárneos. De 102 cepas, 91 foram positivas para femA, 10 para sea, 12 para sed e 4 para see.

Multiplex PCR was used to investigate the presence of enterotoxins genes (sea, seb, sec, sed and see) and femA gene (specific for Staphylococcus aureus) in coagulase-positive staphylococci (CPS) isolated from cheese and meat products. From 102 CPS isolates, 91 were positive for femA, 10 for sea, 12 for sed and four for see.

A pleuropneumonia suína (PPS) provoca prejuízos significativos na suinocultura no mundo. O agente etiológico é a bactéria Actinobacillus pleuropneumoniae (App), que apresenta 15 sorotipos descritos, os quais variam consideravelmente em relação a sua patogenicidade. Nesse sentido, a precisa caracterização patotípica desta bactéria é de grande importância para a adoção de medidas de controle e profilaxia. O diagnóstico e a sorotipificação deste patógeno são realizados pelas técnicas microbiológicas convencionais. Entretanto, problemas nestes esquemas podem ser observados, especialmente em isolados de rebanhos sem histórico de PPS. No Brasil, diversos esforços vêm sendo aplicados no sentido de desenvolver técnicas moleculares que auxiliem no diagnóstico da infecção crônica ocasionada por este agente, principalmente em rebanhos presumidamente sadios e com infecção subclínica. Nesta revisão, são discutidos os resultados obtidos na caracterização de isolados de A. pleuropneumoniae e espécies relacionadas provenientes tanto de suínos com PPS, como de animais presumidamente isentos da infecção. Apresentamos, ainda, perspectivas para o desenvolvimento de metodologias que possibilitem o diagnóstico precoce e a melhor compreensão dos mecanismos de virulência deste patógeno.

Swine pleuropneumonia is responsible for severe losses in swine breeding farms around the world. The aethiological agent, A. pleuropneumoniae, is classified according to different degrees of pathogenicity in 15 serotypes. The correct identification and serological classification of this bacterium is very important for the adoption of control measures. The diagnosis of swine pleuropneumonia is performed by conventional microbiological techniques, however problems in A. pleuropneumoniae identification have been reported. In Brazil, some studies applying molecular tests have been developed specially in isolates from swine herds with subclinical and chronic infections. In this review, we discuss the results on molecular characterization of A. pleuropneumoniae and related species from herds with or without pleuropneumonia. Moreover, we also discuss the perspectives to development early diagnostic methods and to improve understand of pathogenesis mechanisms of these bacteria.

Foram padronizados testes de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) baseados em antígeno capsular purificado de Actinobacillus pleuropneumoniae sorotipos 3, 5 e 7, prevalentes no Brasil. Para a padronização foram utilizadas amostras de soro provenientes de leitões inoculados com os três sorotipos do agente em estudo, dos quais se colheram amostras de sangue semanais, durante 15 semanas para estudo da dinâmica da síntese de anticorpos. O controle negativo dos testes constituiu-se de um mistura de 130 soros de animais livres de Actinobacillus pleuropneumoniae (App). Os antígenos também foram testados com amostras de soro de animais infectados com outros agentes causadores de doenças respiratórias e vacinados contra rinite atrófica. Os antígenos produzidos foram eficientes na detecção de animais infectados com App, permitindo determinar densidades óticas superiores à média dos soros controles negativos acrescida de quatro desvios-padrões. Os testes de ELISA para os sorotipos 3, 5 e 7 apresentaram especificidade de 100% e sensibilidade de 92, 88 e 90%, respectivamente. Não ocorreram reações cruzadas com outros sorotipos, assim como com soros de animais inoculados com outros agentes causadores de problemas respiratórios. Os resultados foram analisados através da análise discriminante de ANDERSON (1958), utilizando-se o programa Statistical Analysis System. Concluiu-se que os antígenos testados são adequados para sorotipar animais que tenham sido submetidos ao screening através de um teste de ELISA polivalente baseado em LPS-LC.

Three ELISA (Enzime-linked immunosorbent assay) tests based on purified capsular antigen from serotypes 3, 5 and 7 of Actinobacillus pleuropneumoniae, prevalent in Brazil, were standardized. Serum samples, collected from piglets inoculated with these three serotypes, were used to standardize the test. In order to study the dynamic of antibody synthesis, weekly blood samples were collected from these piglets. A pool of 130 sera obtained from Actinobacillus pleuropneumoniae -free pigs was used as negative control for the tests. The antigens were also tested with serum samples from animals infected with other respiratory infectious agents and vaccinated against athrofic rinitis. The antigens were efficient in detecting animals infected with App. Optical densities above the average of the negative control sera plus four standard deviation were detected. ELISA tests to serotypes 3, 5 and 7 showed specificity of 100% and sensibility of 92, 88 and 90%, respectively. No cross reaction with other serotypes or with sera of animals inoculated with other respiratory pathogens was observed. The results were analyzed using the Statistical Analysis System program. Antigens tested were adequate for serotyping animals previously screened through a polyvalent LPS-LC ELISA test.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar amostras não hemolíticas de bactérias do gênero Haemophilus isoladas de suínos. As bactérias foram isoladas de material clínico de animais com suspeita da doença de Glässer, de leitões aparentemente sadios provenientes de quatro rebanhos com suspeita clínica desta doença e de casos de poliartrites. Além das características culturais e morfotintoriais, foram utilizados os seguintes testes para a identificação: dependência de NAD(fator V), CAMP, produção de hemolisina, indol, urease e catalase, redução do nitrato e produção de ácido dos carboidratos: glicose, sacarose, arabinose e manose. Dezessete dentre 24 amostras foram classificadas como Haemophilus parasuis (dez isoladas de animais clinicamente doentes e sete de leitões normais). Cinco destas amostras foram classificadas nos sorogrupos 2, 4, 7, ND4 e uma foi não tipável. Quatro das 24 amostras apresentaram características do grupo taxonômico C (teste de arabinose positivo) e três produziram urease. Os testes realizados não permitiram distinguir as amostras urease positivas do gênero Haemophilus das amostras não hemolíticas de Actinobacilius pleuropneumoniae. Mais de 60% das amostras apresentaram sensibilidade in vitro a: ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, danofioxacina, nitrofurantoína, penicilina G, polimixina B e tetraciclina.

The aim of this work was to characterize non haemolytic strains of the genus Haemophilus isolated from pigs. The strains were either isolated from pigs with Glässer's disease or from apparently healthy piglets, from four herds supposediy affected by the disease and from pigs with poliarthritis. The strains were characterized by dependence on NAD (V factor), CAMP test, hemolysin, indole, urease and catalase production, nitrate reduction and acid production from glucose, sucrose, arabinose and mannose. Seventeen out of the 24 strains were classified as Haemophilus parasuis (10 isolates from clinically affected animals and seven from healthy piglets). Five of these strains were identified as serovars 2, 4, 7, ND4 and one was nontypeable. Four out of the 24 strains produced acid from arabinose and were tentativelly allocated on taxonomic group C. Three strains produced urease, but the tests did not accuratelly differenciate them from Actinobacilius pleuropneumoniae. In vitro antimicrobial susceptibility test showed that more than 60% of the strains were sensitive to: ampicillin, cephalothin, chloramphenicol, danofioxacin, nitrofurantoin, penicillin, polymyxin B and tetracycline.